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化验室试剂留存防卫事项

  化验室试剂保存注意事项_化学_自然科学_专业资料。化验室试剂保存注意事项 发布日期:2011-01-19 来源:互联网 浏览次数:1355 化学试剂在贮存时常因保管不当而变质。 有些试剂容易吸湿而潮解或水解; 有的容易跟空气 里的氧气、 二氧化碳或

  化验室试剂保存注意事项 发布日期:2011-01-19 来源:互联网 浏览次数:1355 化学试剂在贮存时常因保管不当而变质。 有些试剂容易吸湿而潮解或水解; 有的容易跟空气 里的氧气、 二氧化碳或扩散在其中的其他气体发生反应, 还有一些试剂受光照和环境温度的 影响会变质。因此,必须根据试剂的不同性质,分别采取相应的措施妥善保存。 一、 防挥发: 1.油封:氨水,浓盐酸,浓硝酸等易挥发无机液体,在液面上滴 10~20 滴矿物油,可以防 止挥发(不可用植物油)。 2.水封:二硫化碳中加 5mL 水,便可长期保存。汞上加水,可防汞蒸气进入空气。汞旁放 些硫粉,一但失落,散布硫粉使遗汞消灭于化学反应中。 3.腊封:、乙醇、甲酸等比水轻的或易溶性挥发液体,以及萘、碘等易挥发固体,紧 密瓶塞,瓶口涂腊。溴除进行原瓶腊封外,应将原瓶置于具有活性炭的塑料筒内,筒口进行 腊封。 二、防潮: 1.漂白粉、过氧化钠应该进行腊封,防止吸水分解或吸水爆炸。氢氧化钠易吸水潮解,应 该进行腊封;硝酸铵、 硫酸钠易吸水结状, 倒不出来, 以至导致试剂瓶破裂,也应严密腊封。 2.碳化钙、无水硫酸铜、五氧化二磷、硅胶极易吸水变质,红磷易被氧化,然后吸水生成 偏磷酸,以上各物均应存放在干燥器中。 3.浓硫酸虽应密闭,防止吸水,但因常用,故宜放磨口瓶中,磨口瓶塞应该原配,切勿对 调。 4.“特殊药品”的地下室,下层布块灰,中层布熟石灰上层布双层柏油纸,方可存放药物。 三、防变质: 1.防氧化:亚硫酸钠、硫酸亚铁、硫代硫酸钠均易被氧化,瓶口应涂腊。 2.防碳酸化:硅酸钠、过氧化钠、苛性碱均易吸收二氧化碳,应该涂腊。 定 肯 分 充 导 领 级 上 到 得 革 改 各 化 深 效 成 推 二 动 主 和 极 积 强 增 核 考 任 目 人 个 对 实 落 性 1-2项 好 责 职 身 自 合 结 ”, 标 指 “硬 的 理 管 政 市 为 把 。 新 创 制 机 作 工 抓 狠 是 一 3.防风化:晶体碳酸钠、晶体硫酸铜应进行腊封,存放在地下室中。 4.防分解:碳酸氢铵、浓硝酸受热易分解,涂腊后,存放在地下室中。 5.活性炭能吸附多种气体而变质,(木炭亦同),应放在干燥器中。 6.黄磷遇空气易自燃,永远保存水中,每 15 天查水一次:磷试剂瓶中加水、置于有水水糟 中,上加钟罩封闭。 7.钾、钠保存在火油中。 8.硫酸亚铁溶液中滴几滴稀硫酸,加入过量细铁粉,进行腊封。 9.葡萄糖溶液容易霉变,稍加几滴甲醛即可保存。 10.甲醛易聚合,应开瓶后立即加少量甲醇;乙醛则加乙醇。 四、防光: 1.硝酸银,浓硝酸及大部份有机药品应该放在棕色瓶中。 2.硝酸盐存放在地下室中既防热,又防光、防火还能防震。 3.有机试剂橱窗一律用黑漆涂染。 4.实验室用色布窗帘,内红外黑双层。 五、防毒害: 1.磷、硝酸银、氯酸钾、氯化汞等剧毒物放地下室内,双人双锁,建立档案,呈批取用, 使用记载,定期检查。 2.磷化钙、磷化铝吸水后放出剧毒性磷化氢,应放在干燥器中保存,贴上红色标签。 3.由于没有通风橱,经常在地面布石灰,吸附某些毒害气相物质。 4.浓酸,浓碱、溴、酚等腐蚀的药物,使用红色标签,以示警戒。 六、防震: 1.硝酸铵震动易爆炸,放地下室中。 2.自制的大晶体明矾、大晶体硫酸铜,用软纸垫包放大口试剂瓶中,进行缓冲,并按“四 位数字”进行编号入厨。 七、防火: 定 肯 分 充 导 领 级 上 到 得 革 改 各 化 深 效 成 推 二 动 主 和 极 积 强 增 核 考 任 目 人 个 对 实 落 性 1-2项 好 责 职 身 自 合 结 ”, 标 指 “硬 的 理 管 政 市 为 把 。 新 创 制 机 作 工 抓 狠 是 一 1.在仪器室“大门附近”、“显眼”、“顺手”的地方设置水缸、消防桶、砂缸、泡沫灭 火器及四氯化碳一瓶。泡沫灭火器药物,每年更新一次。 (如有“CCl4”或“1211”灭火器 更好) 2.室内电线一律换成暗线,以防药物熏蒸,短路走火。 八、防鼠: 1.浆糊中适当多调一些苯酚。 2.对“指示剂”一橱药品,放一些易挥发的药物例如甲醛、煤酚皂等。鼠害严重的橱中, 可交替存放浓盐酸和浓氨水。用以保护其他药品。 3. 用醋酸铅调浆糊涂在鼠洞口四壁, 老鼠出入时污染皮肤, 舔而毙命 (醋酸铅味甜而剧毒) 。 1. 中学化学实验室药品保存时注意下列几个方面: (1)瓶的选择: 固体——广口瓶,液体——细口瓶。 见光易分解的物质——棕色瓶。如:硝酸、硝酸银、氯水等。 (2)瓶塞的选择: 碱性溶液不能用玻璃塞,应该用橡胶塞。如:NaOH 溶液、Na2CO3 溶液等 强氧化性溶液、有机溶剂不能用橡胶塞,应该用玻璃塞。如:硝酸、高锰酸钾溶液、汽油、 苯等。 (3)采用液封法保存的物质: 钠——煤油;白磷——水;液溴——水;四氯化碳——水等。 (4)易与空气中物质反应的物质要密闭保存。如: 与水反应(吸水)的物质:CaCl2、碱石灰等 与 CO2 反应的物质:NaOH、Ca(OH)2、Na2O2 等 与 O2 反应的物质:FeSO4、Na2SO3、C6H5OH、Na2S 等 (5)特殊物质的保存: HF——保存在塑料瓶中。 定 肯 分 充 导 领 级 上 到 得 革 改 各 化 深 效 成 推 二 动 主 和 极 积 强 增 核 考 任 目 人 个 对 实 落 性 1-2项 好 责 职 身 自 合 结 ”, 标 指 “硬 的 理 管 政 市 为 把 。 新 创 制 机 作 工 抓 狠 是 一 废水中酚类的测定 发布日期:2010-09-01 浏览次数:3102 (4-氨基安替比林分光光度法)一、原理酚类化合物于 pH10.0±0.2 介质中,在铁氰化钾存 在下,与 4-氨基安替比林反应,生 (4-氨基安替比林分光光度法) 一、原理 酚类化合物于 pH10.0±0.2 介质中,在铁氰化钾存在下,与 4-氨基安替比林反 应, 生成橙红色的吲哚酚氨基安替比林染料,其水溶液在 510nm 波长处有最大吸 收。 用光程长为 20mm 比色皿测量时,酚的最低检出浓度为 0.1mg/L。 二、仪器 1.500mL 全玻璃蒸馏器。 2.分光光度计。 三、试剂 实验用水应为无酚水。 1. 无酚水: 于 1L 水中加入 0.2g 经 200℃活化 0.5h 的活性炭粉末, 充分振摇后, 放置过夜。用双层中速滤纸过滤,或加入氢氧化钠使水呈强碱性,并滴加高锰酸 钾溶液至紫红色,移入蒸馏瓶中加热蒸馏,收集馏出液备用。 注: 无酚水应贮于玻璃瓶中, 取用时应避免与橡胶制品 (橡皮塞或乳胶管) 接触。 2.硫酸铜溶液:称取 50g 硫酸铜(CuSO4·5H2O)溶于水,稀释至 500mL。 定 肯 分 充 导 领 级 上 到 得 革 改 各 化 深 效 成 推 二 动 主 和 极 积 强 增 核 考 任 目 人 个 对 实 落 性 1-2项 好 责 职 身 自 合 结 ”, 标 指 “硬 的 理 管 政 市 为 把 。 新 创 制 机 作 工 抓 狠 是 一 3.磷酸溶液:量取 50mL 磷酸(密度 20℃=1.69g/mL),用水稀释至 500mL。 4.甲基橙指示液:称取 0.05g 甲基橙溶于 100mL 水中。 苯酚标准贮备液: 称取 1.00g 无色苯酚溶于水,移入 1000mL 容量瓶中,稀释至 标线。至冰箱内保存,至少稳定一个月。 标定方法: (1)吸 10.00mL 酚贮备液于 250mL 碘量瓶中,加水稀释至 100mL,加 10.0mL0.1mol/L 溴酸钾-溴化钾溶液, 立即加入 5mL 盐酸, 盖好瓶盖, 轻轻摇匀, 于暗处放置 10min。加入 1g 碘化钾,密塞,再轻轻摇匀,放置暗处 5min。用 0.0125mol/L 硫代硫酸钠标准滴定溶液滴定至淡黄色,加入 1mL 淀粉溶液,继续 滴定至蓝色刚好褪去,记录用量。 (2)同时以水代替苯酚贮备液作空白试验,记录硫代硫酸钠标准溶液滴定溶液用 量。 (3)苯酚贮备液浓度由下式计算: 苯酚(mg/mL)=15.68×c×(V1-V2)/V 式中:V1——空白实验中硫代硫酸钠标准滴定溶液用量(mL); V2——滴定苯酚贮备液时,硫代硫酸钠标准溶液滴定溶液用量(mL); V——取用苯酚贮备液体积(mL); c——硫代硫酸钠标准滴定溶液浓度(mol/L); 15.68——1/6C6H5OH 摩尔质量(g/mol)。 6.苯酚标准中间液:取适量苯酚贮备液,用水稀释至每毫升含 0.010mg 苯酚。 使用时当天配制。 定 肯 分 充 导 领 级 上 到 得 革 改 各 化 深 效 成 推 二 动 主 和 极 积 强 增 核 考 任 目 人 个 对 实 落 性 1-2项 好 责 职 身 自 合 结 ”, 标 指 “硬 的 理 管 政 市 为 把 。 新 创 制 机 作 工 抓 狠 是 一 7.溴酸钾-溴化钾标准参考溶液(c1/6KBrO3=0.1mol/L):称取 2.784g 溴酸钾(KBrO3) 溶于水,加入 10g 溴化钾(KBr),使其溶解,移入 1000mL 容量瓶中,稀释至标线.碘酸钾标准参考溶液(c1/6KIO3=0.0125mol/L):称取预先经 180℃烘干的碘酸钾 0.4458g 溶于水,移入 1000mL 容量瓶中,稀释至标线.硫代硫酸钠标准溶液(cNa2S2O3·5H2O≈0.0125mol/L):称取 3.1g 硫代硫酸钠溶于 煮沸放冷的水中,加入 0.2g 碳酸钠,稀释至 1000mL,临用前,用碘酸钾溶液标 定。 标定方法: 取 10.00mL 碘酸钾溶液置 250mL 容量瓶中,加水稀释至 100mL,加 1g 碘化钾, 再加 5mL(1+5)硫酸,加塞,轻轻摇匀。置暗处放置 5min,用硫代硫酸钠溶液滴 定至淡黄色,加 1mL 淀粉溶液, 继续滴定至蓝色刚褪去为止,记录硫代硫酸钠 溶液用量。按下式计算硫代硫酸钠溶液浓度(mol/L): c(Na2S2O3·5H2O)=0.0125×V4÷V3 式中:V3——硫代硫酸钠标准溶液消耗量(mL); V4——移取碘酸钾标准参考溶液量(mL); 0.0125——碘酸钾标准参考溶液浓度(mol/L)。 10.淀粉溶液:称取 1g 可溶性淀粉,用少量水调成糊状,加沸水至 100mL,冷 后,置冰箱内保存。 11.缓冲溶液(pH 约为 10):称取 20g 氯化铵(NH4Cl)溶于 100mL 氨水中,加塞, 置冰箱中保存。 注:应避免氨挥发所引起 pH 值的改变,注意在低温下保存和取用后立即加塞盖 严,并根据使用情况适量配置。 定 肯 分 充 导 领 级 上 到 得 革 改 各 化 深 效 成 推 二 动 主 和 极 积 强 增 核 考 任 目 人 个 对 实 落 性 1-2项 好 责 职 身 自 合 结 ”, 标 指 “硬 的 理 管 政 市 为 把 。 新 创 制 机 作 工 抓 狠 是 一 12. 2%(m/V)4-氨基安替比林溶液:称取 4-氨基安替比林(C11H13N3O)2g 溶于水, 稀释至 100mL,置于冰箱中保存。可使用一周。 注:固体试剂易潮解、氧化,宜保存在干燥器中。 13. 8%(m/V)铁氰化钾溶液:称取 8g 铁氰化钾{K3[Fe(CN)6]}溶于水,稀释至 100mL,置于冰箱内保存。可使用一周。 四、测定步骤 1.水样预处理 (1)量取 250mL 水样置蒸馏瓶中,加数粒小玻璃珠以防暴沸,再加二滴甲基橙指 示液,用磷酸溶液调节至 pH4(溶液呈橙红色),加 5.0mL 硫酸铜溶液(如采样 时已加过硫酸铜,则补加适量)。 如加入硫酸铜溶液后产生较多量的黑色硫化铜沉淀,则应摇匀后放置片刻,待沉淀后,再滴 加硫酸铜溶液,至不产生沉淀为止。 (2)连接冷凝器,加热蒸馏,至蒸馏出约 225mL 时,停止加热,放冷。向蒸馏瓶 中加入 25mL 水,继续蒸馏至馏出液为 250mL 为止。 蒸馏过程中,如发现甲基橙的红色褪去,应在蒸馏结束后,再加 1 滴甲基橙指示 液。如发现蒸馏后残液不呈酸性,则应重新取样,增加磷酸加入量,进行蒸馏。 2. 标准曲线mL 比色管中, 分别加入 0、 0.50、 1.00、 3.00、 5.00、7.00、10.00、12.50mL 酚标准中间液,加水至 50mL 标线mL 缓冲 溶液,混匀,此时 pH 值为 10.0±0.2,加 4-氨基安替比林 1mL,混匀。再加 1mL 铁氰化钾,充分混匀后,放置 10min 立即于 510nm 波长,用光程为 20mm 比色皿, 以水为参比,测量吸光度。经空白校正后,绘制吸光度对苯酚含量(mg)的标准曲 线。 定 肯 分 充 导 领 级 上 到 得 革 改 各 化 深 效 成 推 二 动 主 和 极 积 强 增 核 考 任 目 人 个 对 实 落 性 1-2项 好 责 职 身 自 合 结 ”, 标 指 “硬 的 理 管 政 市 为 把 。 新 创 制 机 作 工 抓 狠 是 一 3.水样的测定:分取适量的馏出液放入 50mL 比色管中,稀释至 50mL 标线。用 与绘制标准曲线相同的步骤测定吸光度,最后减去空白实验所得吸光度。 4.空白试验:以水代替水样,经蒸馏后,按水样测定步骤进行测定,以其结果 作为水样测定的空白校正值。 五、计算 挥发酚(以苯酚计,mg/L)=1000×m/V 式中:m——由水样的校正吸光度,从标准曲线上查得的苯酚含量(mg); V——移取馏出液体积(mL)。 注意事项 如水样含挥发酚较高, 移取适量水样并加至 250mL 进行蒸馏,则在计算时应乘以 稀释倍数。 细菌鞭毛染色的方法 发布日期:2011-01-13 来源:互联网 浏览次数:468 介绍了细菌鞭毛染色的几种方法以及个人的实验心的 目前,细菌鞭毛染色方法根据染色剂的不同,可分为碱性复红法、副品红法、结晶紫法、维 多利亚蓝 B 法、 镀银染色法和荧光蛋白染色法 6 类, 前 5 类方法的媒染剂成分中均含有单宁 酸, 染色原理通常是采用不稳定的胶体溶液做媒染剂, 并使其沉淀于鞭毛上而使“鞭毛肿胀 (tar and feather)”,鞭毛直径加粗,进一步染色后即可在油镜下观察。 1. 碱性复红法和副品红法 1926 年由 Gray 首创, 其媒染液成分包括 20%丹宁酸水溶液 2.0ml, 硫酸钾铝饱和水溶液 5ml, 定 肯 分 充 导 领 级 上 到 得 革 改 各 化 深 效 成 推 二 动 主 和 极 积 强 增 核 考 任 目 人 个 对 实 落 性 1-2项 好 责 职 身 自 合 结 ”, 标 指 “硬 的 理 管 政 市 为 把 。 新 创 制 机 作 工 抓 狠 是 一 饱和氯化汞水溶液 2ml,3%碱性复红乙醇(95%)溶液 0.4ml,临用前混合,且需过滤后方可 使用。染片时,媒染剂染色约 6min,具体时间尚需在试验中摸索确定,染色液是抗酸染色 Ziehl-Neelsen 石碳酸复红染液,染片时需要 1 小片吸水纸盖在涂片上,染色 3min。由于该 方法媒染剂混合物不稳定、操作复杂、经验性强。Leifson 于 1930 年建立了副品红法,并 于 1938 年和 1951 年两次对该方法进行了改良, 称为 Leifson 方法。 染色试剂由 3 种溶液组 成:A 为 1.5%NaCl 水溶液,B 为 3%单宁酸水溶液,C 为乙酸副品红 0.9g,碱性副品红 0.3g 溶解于 100ml95%乙醇溶液中。使用时把等体积 A 和 B 混合,然后再加 2 体积 C 与之相混。 该试剂冷藏可保存 1~2 个月。 2. 结晶紫法,又称 Ryu 法 1937 年由 Ryu 建立,1982 年由 Kodaka 等进行了改良。媒染剂:5%石碳酸 10 ml,2g 单宁酸 和 10 ml 饱和硫酸钾铝。染色剂:饱和结晶紫乙醇溶液,即 12g 结晶紫溶于 100 ml 无水乙 醇中。使用时把 10 份媒染剂与 1 份染色剂混合,染色 5min。1989 年,Heimbrook 等使用改 良的 Ryu 染色试剂,采用湿片技术进行鞭毛染色,虽然可以观察到细菌鞭毛,但效果不好。 Ryu 染色方法优点是试剂比较稳定,目前 Difco 公司已经研制出该方法的商品试剂盒,但染 色效果亦不甚理想. 3. 维多利亚蓝 B 法 1990 年由 Inoue 等报道日本制药株式会社 Shionogi Seiyaku 研制出一种细菌鞭毛染色商品 试剂盒。其试剂组成包括维多利亚蓝 B、苯酚、单宁酸和硫酸钾铝,染色约需 7min。该试剂 保存期约为 6 个月, 关于其染色效果虽然有过一篇文献评述, 但却没有采用评分法进行评价, 很难判断其染色效果。 定 肯 分 充 导 领 级 上 到 得 革 改 各 化 深 效 成 推 二 动 主 和 极 积 强 增 核 考 任 目 人 个 对 实 落 性 1-2项 好 责 职 身 自 合 结 ”, 标 指 “硬 的 理 管 政 市 为 把 。 新 创 制 机 作 工 抓 狠 是 一 4. 镀银染色法 1958 年 Rhodes 根据 Fontana 的螺旋体改良镀银染色法,建立了一种细菌鞭毛镀银染色法。 试剂分为媒染剂和银染剂。媒染液:10%单宁酸 10 ml 加 5 ml 饱和硫酸钾铝水溶液,再加 1 ml 苯胺饱和水溶液形成沉淀,通过摇动又能重新溶解,加入 5%FeCl3 水溶液 1 ml 形成黑色 溶液,稳定 10 min 后使用。银染液:配制 5%AgNo3 水溶液 100 ml 取出 10 ml 备用,再缓慢 加入浓氨水(比重 0.880)使形成的沉淀刚好重新溶解,最后把备用的 10 mlAgNo3 溶液向 其中逐滴加入,直到摇动后呈现轻微而稳定的薄雾状溶液为止,避光保存,可稳定数周。用 媒染液染片 3~5min,蒸馏水充分洗涤后,再把银染液滴加至涂片上。加热至接近沸腾,染 色 3~5min。 由于 Rhodes 镀银染色法媒染液成分复杂、 操作繁锁, 所以 1965 年 Blenden 等改良了细菌鞭 毛镀银染色法的配方。试剂 A:100 ml 蒸馏水中加入 5 g 单宁酸,1.5 gFeCl3,15%福尔马 林 2 ml,1%NaOH 溶液 1 ml。试剂 B:使用 2% AgNo3,其他同于 Rhodes,但试剂不稳定,要 求在 4h 内使用,并用要用氨水调 pH 至 10。试剂 A 染片 2~4min,试剂 B 染色 30 s,不需 加热。 由于以上两种镀银染色方法都要使用营养琼脂斜面培养物, 并且需用无菌蒸馏水悬浮菌液制 片,未采用评分法评价镀银染色方法。因此 1977 年,West 等对镀银染色法进一步改良,制 备涂片时直接使用血平板, 评价染色效果首次使用 5 分制, 通过该评价方法证明了加热银染 液染片可以提高染色效果。 试剂配方: 媒染液为饱和硫酸钾铝水溶液 25 ml, 10%单宁酸 50 ml, 5%FeCl3 水溶液 5 ml, 5℃保存, 染色液配制同 Rhodes, 但需避光 5℃保存。 媒染液染片 4min, 银染液滴加至涂片上加热至微冒蒸汽,染色 4min。同时 West 等还对使用不同培养基进行染 色效果评价,包括半固体动力培养基、血琼脂平板、TSA(trypticase soy agar)斜面,其 定 肯 分 充 导 领 级 上 到 得 革 改 各 化 深 效 成 推 二 动 主 和 极 积 强 增 核 考 任 目 人 个 对 实 落 性 1-2项 好 责 职 身 自 合 结 ”, 标 指 “硬 的 理 管 政 市 为 把 。 新 创 制 机 作 工 抓 狠 是 一 中半固体动力培养基和 TSA 斜面 25℃, 培养 18~24h; 血琼脂平板 35~37℃, 培养 18~24h。 评价结果血琼脂平板 35~37℃,培养 18~24h 不适于细菌鞭毛染色,而半固体动力培养基 和 TSA 斜面 25℃,培养 18~24h 适合于细菌鞭毛染色,同时也证明了使用福尔马林处理标 本制备涂片并不能有效阻止鞭毛脱落。 由于镀银染色法媒染液不稳定,需避光 5℃保存,1992 年 Porter 等继续改良该方法,其试 剂配方同 West 等的方法,只是媒染剂避光室温可保存数月,延长媒染剂染色时间为 8 min, 染色液不需加热,只染 30 s,制备涂片程序略有不同。使用 TSA 平板,36℃培养 24h,但遗 憾的是 Porter 等只使用了 1 种细菌(奇异变形杆菌)进行研究。 于是 1994 年 Finegan 等进一步证实使用过期媒染剂进行镀银染色可以增强鞭毛染色效果, 并使用 4 种细菌 (绿脓假单胞、 奇异变形杆菌、 黏质沙雷菌、 枯草芽孢杆菌) , 用 trypitcase soy 肉汤及其琼脂平板,26℃培养 24h。试剂配方仍不变,媒染液放置 1、2、4、8、16 周后 进行染色,媒染液染色 8 min,银染液染色 30~60 s,不需加热。这 4 种细菌均染色成功, 从而证明媒染液可至少放置 16 周。 5、鞭毛的负染 具体操作:菌悬液,直接滴在铜网上,1-2 分钟后,吸去多余的菌液(似干非干的程度), 再滴上 0.1%的磷钨酸溶液,1 分钟后,吸去多余的染液,然后就可以在电镜下观察了。一 般染色后十五天之内看电镜。时间太长效果不好。这是我试验用的方法。 曾做过一段时间的细菌鉴定,以下是一些染色心得: 首先染色用玻片一定要干净, 洗液泡过之后蒸馏水冲洗干净。 涂片的时候菌千万别涂得太多。 第一部染色时, 可将玻片置于水浴锅内, 温度保持在 35 度,盖上盖 (主要是保持一定的湿度, 定 肯 分 充 导 领 级 上 到 得 革 改 各 化 深 效 成 推 二 动 主 和 极 积 强 增 核 考 任 目 人 个 对 实 落 性 1-2项 好 责 职 身 自 合 结 ”, 标 指 “硬 的 理 管 政 市 为 把 。 新 创 制 机 作 工 抓 狠 是 一 防止染色液变干不利于冲洗,这步非常有用)。一定要将第一步使用的媒染液冲洗干净,否 则影响染色效果,背景可能非常 脏。其他的步骤参考书上的资料进行,一般没什么问题。 我用这种方法染单鞭毛的弧菌,效果非常好。 注意事项: 1. 要注意培养条件和培养时间:①用点接法在新配制的牛肉膏蛋白胨半固体平板上接种。 一般一个平板点接 3~4 处。 经比较用半固体培养基培养出来的菌体活动度大, 鞭毛长且多, 易于染色,这可能与半固体培养基更适于菌体运动、鞭毛生长较好有关。用点接种法在平板 上接种更易于挑取边缘幼龄的菌体。②培养时间要严格掌握,一般培养 9~12h 较好,菌龄 超过 15h,鞭毛染色效果较差,这可能与老龄菌体活动度降低、鞭毛易脱落有关。 2.染色过程中的细节也应充分注意: ①取菌要取菌落边缘的幼龄菌体。 ②取菌后的接种环在 载片上的蒸馏水中轻轻沾几下即可,不要用力太猛,更不能用接种环大幅度涂开;将载片稍 倾斜, 使菌液散开即可, 否则鞭毛易脱落, 造成染色失败。 ③鞭毛染色的玻片只能自然干燥, 不能用热风吹干,不能热固定,这是由于加热后菌体易变形,鞭毛易脱落,影响观察。④A 染液染 3~5 min,其后用蒸馏水(自来水效果差)冲洗时一定要充分,否则加 B 染液后, 背景很脏, 鞭毛不易被观察到, 影响实验效果。 ⑤加 B 染液后,将玻片稍加热(但不能太热, 更不能沸腾或蒸干)使其微冒蒸汽,30~60 s,染色效果较不加热为好。⑥B 染液染完后, 用蒸馏水冲洗比用自来水冲洗效果好。 原代细胞复苏的基本操作方法 发布日期:2011-01-13 来源:中国生物器材网 浏览次数:406 原代细胞复苏的基本操作方法 定 肯 分 充 导 领 级 上 到 得 革 改 各 化 深 效 成 推 二 动 主 和 极 积 强 增 核 考 任 目 人 个 对 实 落 性 1-2项 好 责 职 身 自 合 结 ”, 标 指 “硬 的 理 管 政 市 为 把 。 新 创 制 机 作 工 抓 狠 是 一 一、实验准备 (1)仪器:净化工作台、离心机、恒温水浴箱、倒置相差显微镜、培养箱、液氮冰箱 (2)玻璃器皿:吸管(弯头、直头)、培养瓶、玻璃瓶(250ml、100ml)、废液缸 (3)塑料器皿:吸头、枪头、胶塞、移液管(10ml)、15ml 离心管、冻存管(1~2ml) (4)其他物品:微量加样枪、红血球计数板、记号笔、医用橡皮膏、移液枪 (5)试剂:PBS、小牛血清、培养液、双抗(青霉素、链霉素)、胰蛋白酶(0.08%) 二、操作步骤 (1)从液氮容器中取出冻存管,直接浸入 37℃温水中,并不时摇动令其尽快融化。 (2)从 37℃水浴中取出冻存管,75%酒精消毒后,打开盖子,用吸管吸出细胞悬液,加到 离心管中。PriCells 推荐接种培养瓶,37℃培养箱静置培养。 (3)离心,1000rpm,5min。PriCells 推荐不离心。 (4)弃去上清液,加入含 10%小牛血清培养液重悬细胞,计数,调整细胞密度,接种培养 瓶,37℃培养箱静置培养。PriCells 推荐小牛血清浓度依据原代细胞种类。 (5)次日更换一次 1/2 培养液,继续培养。 三、注意事项 (1)将冻存管从液氮容器中取出时,要做好防护工作,以免冻伤。 (2)取出冻存管后立即放入水浴中,使其尽快融化(在 1-2 分钟内)。 (3)复苏最好用新配制的培养液。 糖酵解试验 发布日期:2010-12-30 来源:《食品微生物》 浏览次数:265 本文介绍了常见的细菌生化鉴定实验之一——糖酵解实验的原理 定 肯 分 充 导 领 级 上 到 得 革 改 各 化 深 效 成 推 二 动 主 和 极 积 强 增 核 考 任 目 人 个 对 实 落 性 1-2项 好 责 职 身 自 合 结 ”, 标 指 “硬 的 理 管 政 市 为 把 。 新 创 制 机 作 工 抓 狠 是 一 不同的微生物可对各种糖类、醇类、糖昔类等进行分解,但其分解能力和分解产物均因不同 的微生物而不同(见表)。如大肠杆茵能分解乳糖和葡萄糖,而沙门氏茵只能分解葡萄糖,不 能分解乳糖。 大肠杆菌有甲酸解氢酶, 能将分解糖所生成的甲酸进一步分解成二氧化碳和氢 气.故产酸又产气,而沙门氏茵无甲酸解氢酶,分解葡萄糖仅产酸而不产气。在进行大肠茵 群测定时,就是根据这一原理而采用乳糖发酵试验。当大肠茵群分解乳糖而产酸时,可使培 养基内的溴甲酚紫指示剂由蓝色变成黄色,产生的气体可在倒置的小管内观察, 表 常用于糖发酵试验的糖类、醇类和糖苷类 试验方法:以无菌操作,用接种针或环移取纯培养物少许,接种于发酵液体培养基管中,若 为半固体培养基,则用接种针作穿刺接种。接种后,置 36±1.0°C 培养,每天观察结果, 定 肯 分 充 导 领 级 上 到 得 革 改 各 化 深 效 成 推 二 动 主 和 极 积 强 增 核 考 任 目 人 个 对 实 落 性 1-2项 好 责 职 身 自 合 结 ”, 标 指 “硬 的 理 管 政 市 为 把 。 新 创 制 机 作 工 抓 狠 是 一 检视培养基颜色有无改变(产酸),小倒管中有无气泡,微小气泡亦为产气阳性,若为半固 体培养基,则检视沿穿刺线和管壁及管底有无微小气泡,有时还可看出接种菌有无动力,若 有动力,培养物可呈弥散生长。本试验主要是检查细菌对各种糖、醇和糖苷等的发酵能力, 从而进行各种细菌的鉴别,因而每次试验,常需同时接种多管。一般常用的指示剂为酚红、 溴甲酚紫,溴百里蓝和 An-drade 指示剂。 标准菌验收、制备、保藏、 传代、使用、销毁的管理 发布日期:2010-12-31 浏览次数:616 介绍了微生物实验中使用的标准菌的验收、制备、保藏、 传代、使用、销毁的管理规程 规 定了质量管理部门实验用标准菌种的验收、制备、储管、使用、以及销毁等的相关规定。适 用于微生物限度检查、无菌检查、抗生素微生物(效价)测定、评价防腐剂和抗菌剂的抑菌 效果和确认灭菌效果、检验方法的验证、培养基的适用性检查,样品检验时的阳性对照等。 依据: 中国药典 2010 年版二部及菌种使用说明书 1.标准菌的来源 标准菌株由中国药品生物制品检定所医学菌种保藏中心(China Medical culture collection ,CMCC)提供的冷冻干燥菌种(0 代)或由上级药检部门已接种好的菌种斜面(3 代)。黑曲霉的 0 代菌种为保存于含 15%甘油的 0.9%无菌氯化钠溶液中的孢子悬液冷存管。 中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌种的标签 CMCC (B)代表细菌(bacteria),CMCC(F)代表真菌(fungi)每种菌具有固定的代号。 2.标准菌的验收 从菌种保藏中心购买的原始菌种管是玻璃安瓿装的冻干菌, 接收同时应检查是否有随菌种附 定 肯 分 充 导 领 级 上 到 得 革 改 各 化 深 效 成 推 二 动 主 和 极 积 强 增 核 考 任 目 人 个 对 实 落 性 1-2项 好 责 职 身 自 合 结 ”, 标 指 “硬 的 理 管 政 市 为 把 。 新 创 制 机 作 工 抓 狠 是 一 有的相关资料。接收菌种时应检查安瓿的数量和名称,和每一支安瓿的完整性。在相应的菌 种接收记录上记上所有的关于菌种的信息,如名称、数量和接收日期等。在菌种安瓿及菌种 管上粘贴标签,内容包括:菌种名称、菌种代号、代次、接收日期、接收人、贮存条件、有 效期至。新购入的 0 代原始菌种储存于-20℃,有效期为三年。从上级药检部门购买的已接 种好的菌种斜面(3 代)应检查菌种管是否完好。储存于 2~ 8 ℃,有效期为 3 个月。 3. 标准菌的复苏、复壮及标准储备菌株的制备 3.1 物品及试剂:接种针、酒精灯、移液管、75%酒精及 75%酒精棉球 3.2 培养基 改良马丁琼脂培养基:用于黑曲霉复苏、复壮. 液体硫乙醇酸盐培养基:用于生孢梭菌复苏、复壮. 营养肉汤培养基:用于金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、乙型副伤寒沙门菌、 短小芽孢杆菌、铜绿假单胞菌复苏、复壮。 改良马丁培养基:用于白色念珠菌复苏、复壮. 3.3 操作步骤: a.打开洁净工作台。 b.在安瓿的外表面用 75%的酒精擦拭并让其自然风干。 c.用一小砂轮在安瓿的上部划一条线,用手轻轻将安瓿掰开(开启安瓿时必须小心,因为安 瓿遇热时可能会破裂)。 d.以无菌方法用一无菌吸管从已准备好的上述液体培养基中移取 0.5~0.8 ml 到安瓿中。 e.轻轻地旋转安瓿以使冻干菌种和液体培养基充分混合并完全溶解。 定 肯 分 充 导 领 级 上 到 得 革 改 各 化 深 效 成 推 二 动 主 和 极 积 强 增 核 考 任 目 人 个 对 实 落 性 1-2项 好 责 职 身 自 合 结 ”, 标 指 “硬 的 理 管 政 市 为 把 。 新 创 制 机 作 工 抓 狠 是 一 f.用无菌吸管将安瓿内菌液全部转接到相应的液体培养基。 g.根据安瓿上所标明的不同菌种类型而将其培养于相应的温度(细菌培养温度 30~35℃, 培养 18~24 小时;线 天。观察是否浑浊,浑浊说明菌种 复苏生长;若不浑浊,细菌应延长培养时间至 7 天,线 天,若仍未 浑浊,灭菌处理。 h.黑曲霉的菌悬液先室温待菌悬液融化后用无菌吸管吸取管内液体 1~2 滴滴在改良马丁琼 脂斜面上,用吸管涂布均匀,置 23~28℃培养 5~7 天,斜面正面为黑褐色厚绒状,色泽均 一,不应有杂色,斜面侧面无色,接近菌层培养基略带黄色。确认后用含有 0.05%(ml/ml) 的吐温-80 的 0.9%无菌氯化钠溶液洗脱到无菌试管中。 i.取经复苏后的上述细菌菌液 8-10ml 至液体培养基中按 g 项操作对菌种进行复壮。以无菌 技术向复壮后的菌种中加入 100ml20%的无菌甘油混匀,1-2ml/管分装于冻存管。每个菌种 制备 10 支,按顺序进行编号,最后一支做为质控管进行质量控制,即进行相应的确认。其 余作为储备管。 黑曲霉的 h 项下洗脱液按 h 项下方法进行复壮, 制成复壮后的孢子悬液 20ml。 以无菌技术向复壮后的菌种中加入 20ml 、30%的无菌甘油混匀,1-2ml/管封存于冻存管。 制备 10 支,按顺序进行编号,最后一支做为质控管进行质量控制,即进行相应的确认。其 余作为储备管。将上述制备好的冻存管逐支粘贴标签。内容包括:菌种名称、菌种代号、编 号、代次、制备日期、制备人、贮存条件、有效期至等。 j.储备菌种管制备成功,储存于-20℃,有效期为三年。 3.4 菌种确认 用无菌接种环从质控管中取细菌培养物接种到营养琼脂培养基平板上, 或相应的宜于该细菌 生长的鉴别平板上,划线分离出单个菌落。然后在 30~35℃下培养 2~3 天;同样的方法取 定 肯 分 充 导 领 级 上 到 得 革 改 各 化 深 效 成 推 二 动 主 和 极 积 强 增 核 考 任 目 人 个 对 实 落 性 1-2项 好 责 职 身 自 合 结 ”, 标 指 “硬 的 理 管 政 市 为 把 。 新 创 制 机 作 工 抓 狠 是 一 真菌到玫瑰红钠琼脂培养基平板,并在 23~28℃下培养 7 天;培养后,观察其菌落形态, 应符合该菌种形态特征。 3.5 污染处理 假如在该平板上发现有其他菌落生长, 则说明或操作有污染或菌种不纯。 将此被污染了的培 养物灭菌处理。 可寻找原因重新分离挑选纯菌落转接斜面菌种作为第四代。 并重新制备储备 菌种管 3.6 菌种的传代与保藏 将菌种接种至一新鲜培养基上,每萌发一次即称为一代,因此,当原始菌种复溶并转至新培 养基内生长,即认为已传代一次,从菌种保藏中心获得的冷冻干燥的菌种为第 0 代,冷冻干 燥的原始菌种开启后转种后为第 1 代,直到第 3 代为工作菌种。菌种的传代次数(自原始菌 种冻干粉起)不得超过 5 代。 菌种的传代保藏过程 3.3 项下标准菌的复苏为传第一代,复壮为第二代。 传第三代时取 1 支冻存管自然解冻, 将其转接斜面菌种作为工作用菌种。此时,工作用菌种为第 3 代。工作用菌种,分为两类: 一类用于定期传代(W3),一类用于实验用(S3)。 定期传代用菌的传代其操作步骤如下(斜面接种法): (1)从冰箱冷藏室中取出菌种斜面后,应在室温放置约 30 分钟。 (2)将装有新鲜配制的培养基菌种保藏管管壁上注明菌名及接种日期,和传代菌种一并移 入洁净工作台,打开紫外灯照射一小时。 (3)关闭紫外灯。点燃酒精灯,左手握住菌种斜面,将管口靠近火焰上方,右手拿接种棒 后端,将接种环烧红约 30 秒,随后将接种棒金属部分在火焰上烧灼,往返通过三次。 定 肯 分 充 导 领 级 上 到 得 革 改 各 化 深 效 成 推 二 动 主 和 极 积 强 增 核 考 任 目 人 个 对 实 落 性 1-2项 好 责 职 身 自 合 结 ”, 标 指 “硬 的 理 管 政 市 为 把 。 新 创 制 机 作 工 抓 狠 是 一 (4)右手用无名指、小指及掌部夹住管塞,左手将管口在火焰上旋转烧灼,右手再轻轻拔 开管塞,将接种环伸入管内先在近壁的琼脂斜面上靠一下,稍冷后再至菌苔上,刮取少量菌 苔,随即取出接种棒并将菌种管口移至火焰上方。 (5)塞上管塞,左手将菌种管放下,取营养琼脂斜面(或改良马丁琼脂斜面)一支,照上 述操作打开管塞, 将接种环伸入管内至琼脂斜面的底部向上划一条直线, 然后从底部向上作 连续曲线划线,一直划到斜面顶端,使细菌接种在斜面的表面上。 (6)取出接种环,在火焰上方将培养基管盖上塞子,然后将接种过细菌的接种环在火焰上 烧灼灭菌。 (7)将已接种好的细菌管置 30~35℃细菌培养箱培养 22 ~24h,线℃线 天。 当工作用菌种传代代数小于 5 时,可直接用上一代工作用菌种转接下一代工作用菌种,如: (W3)可直接转接为(W4)。按上述程序操作,直至(W4)转为(W5)为止,需重新接种, 旧的工作菌种进行销毁。 菌种斜面的培养、保藏条件及时间 菌 种 培养条件及时 间 存条件及时间 大肠埃希菌(CMCC(B)44102) 30~35℃22~ 培养基 保 定 肯 分 充 导 领 级 上 到 得 革 改 各 化 深 效 成 推 二 动 主 和 极 积 强 增 核 考 任 目 人 个 对 实 落 性 1-2项 好 责 职 身 自 合 结 ”, 标 指 “硬 的 理 管 政 市 为 把 。 新 创 制 机 作 工 抓 狠 是 一 24h 营养琼脂培养基 2℃~ 8 ℃保存 3 个月 30~35℃22~ 24h 营 金黄色葡萄球菌(CMCC(B)26003) 养琼脂培养基 2℃~ 8 ℃保存 3 个月 枯草芽孢杆菌(CMCC(B)63501) 24h 营养琼脂培养基 30~35℃22~ 2℃~ 8 ℃保存 3 个月 30~35℃22~ 2℃~ 8 ℃保存 3 个月 30~35℃22~ 24h 营养琼脂 铜绿假单胞菌(CMCC(B)10104) 24h 营养琼脂培养基 乙型副伤寒沙门菌(CMCC(B)50094) 培养基 2℃~ 8 ℃保存 3 个月 生孢梭菌(CMCC(B)64941) 24h 营养琼脂培养基 30~35℃22~ 2℃~ 8 ℃保存 3 个月 23~28℃ 最多 7 2℃~ 8 ℃保存 3 个月 23~28℃ 2℃~ 8 ℃保存 3 个月 30~35℃22~ 2℃~ 8 ℃保存 3 个月 白色念珠菌(CMCC(F)98001) 天 改良马丁琼脂培养基 黑曲霉(CMCC(F)98003) 最多 7 天 改良马丁琼脂培养基 短小芽孢杆菌(CMCC(B)63602) 24h 营养琼脂培养基 注:菌种斜面 1 次/周观察状态是否正常。 3.7 菌种的使用及销毁 每次进行菌种复活时,只能复活一个菌种。如果要复活其他菌时,应对所用物品重新消毒灭 菌。 每次操作,都应进行记录。菌种管上应贴有牢固的标签。标明菌种名称、菌种代号、代次、 定 肯 分 充 导 领 级 上 到 得 革 改 各 化 深 效 成 推 二 动 主 和 极 积 强 增 核 考 任 目 人 个 对 实 落 性 1-2项 好 责 职 身 自 合 结 ”, 标 指 “硬 的 理 管 政 市 为 把 。 新 创 制 机 作 工 抓 狠 是 一 传代人、编号和传代日期、贮存条件、有效期至等。 废弃菌种及实验用品废弃物的处理: 121℃ 高压蒸汽灭菌 30 分钟。 并对操作过程进行记录。 小麦粉中掺滑石粉的鉴别 发布日期:2011-01-04 来源:互联网 浏览次数:1040 在农贸市场上, 有些商贩为达到小麦粉的增加重量的目的, 在小麦粉中掺入大白粉、 滑石粉, 这些物质都是无机物。 正常小麦粉中矿物质(以灰分计)的含量:特制粉不超过 0.75%,标准粉不超过 1.2%,普 通粉不超过 1.5%。小麦粉中掺入了石膏、滑石粉等,皆能使小麦粉中的灰分增加。在灰分 中测出钙离子、硫酸根、二氧化硅,就能定性掺入的物质。 (1)灰分的测定方法:称取样品 2 克放入预先 550℃的灼烧恒重的坩埚中,在电炉上加热至 炭化,再放入 550℃的马费炉中,灼烧 2 小时,取出冷却降温。如果灰化不完全,再加水或 硝酸使灰分湿润,微温至干,然后再放在马费炉中灰化 2 小时,取出冷却至 200℃,移至干 燥器中,30 分钟后称重,计算灰分。 正常小麦粉的灰分为 0.75%~1.5%,如果小麦粉中检验出的灰分在 1.06%~2%,认为有可 疑现象,如果灰分在 2%以上,说明小麦粉中掺入了石膏等无机物。采用这种测定方法,可 测小麦粉中掺入 1%的石膏或滑石粉。 (2)二氧化硅定性方法:将测定完灰分含量后的灰分中,加入 2 倍量以上的研成细末的氢氧 化钾,混合均匀,于 600℃熔融,冷后加水溶解,向水溶液中滴加(1:1)盐酸,使之呈酸性, 如果有胶状物析出(H3SiO3),说明检出了二氧化硅,同时作空白对照。 正常的小麦粉,一 般用此法检不出二氧化硅,但掺入大白粉、滑石粉在 1%以上时,则可检出。 定 肯 分 充 导 领 级 上 到 得 革 改 各 化 深 效 成 推 二 动 主 和 极 积 强 增 核 考 任 目 人 个 对 实 落 性 1-2项 好 责 职 身 自 合 结 ”, 标 指 “硬 的 理 管 政 市 为 把 。 新 创 制 机 作 工 抓 狠 是 一 (3)钙离子和硫酸根检验方法:取样品灰分,加(1:1)盐酸溶液 10 毫升,加热溶解、过滤, 滤液分成两份,一份溶液中加入 1%氧化钡溶液 1 毫升,如果产生大量沉淀,说明检出了硫 酸根,同时作空白对照。再在另一份滤液中加入饱和草酸铵溶液 1 毫升,滴加(1:1)氨水呈 弱碱性,产生大量沉淀,则为阳性,同时作空白对照。 灰分中如果仅检出钙离子、硫酸根,可认为是掺入石膏,如果同时检出二氧化硅及上述两种 离子,可认为是检出了滑石粉或大白粉。当前市场上出售的大白粉,是将滑石粉精制加工而 成,其成分与滑石粉相同。 定 肯 分 充 导 领 级 上 到 得 革 改 各 化 深 效 成 推 二 动 主 和 极 积 强 增 核 考 任 目 人 个 对 实 落 性 1-2项 好 责 职 身 自 合 结 ”, 标 指 “硬 的 理 管 政 市 为 把 。 新 创 制 机 作 工 抓 狠 是 一

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